生物比赛心得体会和感想 生物竞赛心得体会(七篇)

体会是指将学习的东西运用到实践中去，通过实践反思学习内容并记录下来的文字，近似于经验总结。优质的心得体会该怎么样去写呢？以下是我帮大家整理的最新心得体会范文大全，希望能够帮助到大家，我们一起来看一看吧。

2022生物比赛心得体会和感想一

没有问题的课堂如一潭死水，缺少生机和活力。所以在教学过程中，我严格落实“以问题为中心”的理念。整个教学过程以问题为线索，环环相扣，层层深入，逐步拓展学生的思维，挖掘学生的潜力。只有问题才能把学生真正的带入课堂，领进知识的海洋。

为了学生更形象、更直观地理解知识，在教学过程中，我运用了标本、挂图和现代信息技术。学生通过面对面地接触兔的骨骼标本，能更具体、更清楚的了解骨骼的组成。由此也会顺其自然地引出关节的知识，再结合挂图讲解，学生对关节的理解更透彻。在分析骨、关节和肌肉的协调配合时，我利用卫星播放屈肘、伸肘的动作视频，让学生观看，再结合自身感受屈肘、伸肘动作，这样学生对知识的理解就更加深刻，更加生动。现代信息技术的应用使我的教学过程更加简洁、明了。

学生是课堂的主体，所以在教学活动中，学生的活动也是主体。尤其是在解决问题过程中得以充分体现。如本节课的探究活动中，我组织学生以小组为单位进行讨论，学生围绕我预设问题展开分析，在探究过程中，我进行巡视，了解个小组讨论情况，对学生难以解决的问题加以适当的点拨指导，帮助学生解决问题。然后以代表发言的形式把各小组的探究结果在全班进行交流。整个过程是合作学习与教师点拨相结合。 人无完人，课无完课。我的教学过程中也存在一些不足之处。下面我就从几个方面谈一谈：

在课堂上，面对众多外来的听课领导和教师，我的情绪很紧张，因情绪紧张就出现了失误之处。语言组织出现词不达意的错误，这也严重影响到教学效果。

我在教学过程中，虽然采取了小组合作学习的方式解决问题，但学生合作活动表现不够积极踊跃，给人的感觉好似在走秀。这样就没有达到预期效果，也就影响到课堂气氛。

课堂中，教学程序较流畅，但在每个程序实施中提出的问题顺序有些不妥，有的问题还被遗漏了。如书中四个讨论问题本应穿插在讲解知识过程中，而我是讲完之后一一让学生思考解答。这样在学生的理解方面就没做到层层深入。

学生的情绪没有完全被调动起来。个别学生缺少积极主动地参与意识。学生的兴趣没激发出来，学生的思维就得不到扩展，对问题的探究就缺少深度，致使学生的讨论活动不热烈。 针对以上的不足之处，我在今后教学中，应努力提高自身心理素质，加强对业务知识的学习，提高自己的教学水平，增强自己的自信心。

备课时，我不仅要认真备教材，而且要重点备学生。尤其是在学生的学习方式方面，要针对设计的问题，多角度考虑何种方式最恰当。课堂中会出现什么现象，课前都要做出预测并找出解决办法，以免课堂上出现漏洞。同时要把学习的内容与学生的身心发展特点相结合，积极调动学生的学习热情，以便达到更好的学习效果。

2022生物比赛心得体会和感想二

用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动

1.初步掌握高倍显微镜的使用方法。

2.观察高等植物的叶绿体在细胞质基质中的形态和分布

高等植物的叶绿体呈椭球状,在不同的光照条件下,叶绿体可以运动,改变椭球体的方向,这样既能接受较多的光照,又不至于被强光灼伤。在强光下,叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源;在弱光下,叶绿体以其椭球体的正面朝向光源。因此,在不同光照条件下采集的葫芦藓,其小叶内叶绿体椭球体的形状不完全一样。活细胞中的细胞质处于不断的流动状态，观察细胞质的流动，可以用细胞质基质中的叶绿体的运动做为标志。

藓类的叶，新鲜的黑藻，显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，刀片，培养皿，铅笔

1．制作藓类叶片的临时装片

2．用显微镜观察叶绿体

3．制作黑藻叶片临时装片

4．用显微镜观察细胞质流动

物理实验报告 ·化学实验报告 ·生物实验报告 ·实验报告格式 ·实验报告模板

1．细胞质基质中的叶绿体是否静止不动，为什么？

2．叶绿体的形态和分布与叶绿体的功能有什么关系？

3．植物细胞的细胞质处于不断的流动状态，这对于活细胞完成生命活动有什么意义？

4．用铅笔画一个叶片细胞，标出叶绿体的大致流动方向。

2022生物比赛心得体会和感想三

调查人：x x x 班级： 初一、x班 调查地点：xx学校

调查时间：20xx年9月10日

调查目的：了解校园陆生生物对校园环境的影响, 认识绿化校园、净化空气的重要性，保护校园美好的环境。

调查方法：在老师带领下实地调查。

材料用具：调查表、笔、放大镜、望远镜、夹子、手套等 方法步骤：

1、设计调查表：设计合理的调查表

2、分组：以6为人为一组，确定一个人为组长

3、选择路线:校园顺时针

调查记录：

沿着事先设计好的路线边观察边记录，记录不同的植物、动物名称、数量、以及生活环境的特点。

沿途观察到的生物主要有：杂草、蝴蝶、蜜蜂、蚯蚓、小叶黄杨、蜘蛛、蒲公英、蚊子、狗尾草、小飞蛾、毛毛虫、苍蝇、七星瓢虫、白杨树、蚂蚁、蚱蜢、蝗虫、蜻蜓、麻雀、等。

归类：

校园生物种类调查表

收获和体会

通过这次调查活动，我初步学会了调查方法，认识了许多生物，明白了小小的校园就有如此多而鲜活的生命，今后我会加倍认真、仔细调查我们洪山镇的周边的生物，才能更好的了解这个地区的生物多样性。这就需要我们从小树立认真学习的态度，养成善于留心观察的好习惯！来丰富自己的知识，使自己的视野更开阔。将来才能为我们的祖国做出我们应该做的贡献。同学们：为保护环境、保护生物、保护我们共同的家园而努力吧！

2022生物比赛心得体会和感想四

第十次实验分离产淀粉酶微生物

学院：生命科学学院

专业：生物科学类

年级：20xx级

姓名：

学号：1007040085

20xx年xx月xx日

实验十分离产淀粉酶的微生物

1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。

2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。

3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。

4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。

5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。

土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有

1、简单单细胞挑取法

2、平板分离法和稀释涂布平板法

此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括：

1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株

2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。

以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。

1、器材：

培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、、天平、滤纸、ph试纸等。

2、试剂：

配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏、nacl、琼脂、蛋白胨）、淀粉、卢戈氏碘液、蒸馏水、250ml三角瓶中装90ml无菌水加20粒玻璃珠，作稀释用等。

3、土样：

取自贵州大学农生楼后土壤10g，地下10cm左右。

1、配制牛肉膏蛋白胨培养基：

1）配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基400ml（用于11个平皿和7支试管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g

蛋白胨1%……………………………………4g

nacl0.5%…………………………………..2g

琼脂2%……………………………………..8g

淀粉0.5%........................................2g

ph……………………………………7.0~7.2

（2）无菌水的制备

分别取9ml蒸馏水加入5支试管中，加塞后用报纸包扎捆绑，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌备用。取90ml蒸馏水加入250ml三角瓶中，同样的操作，灭菌备用。

（3）器皿的准备

将刻度吸管用报纸包扎，培养皿装入专用灭菌杯分别放入高温灭菌箱灭菌备用。

2）倒11个平板和7支试管斜面，包扎，0.1mp、121℃、灭菌30min.

2、制备土壤稀释液：

称取土样10g，放入盛有250ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，振荡摇匀10min使土和水充分混合，然后用移液枪从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀释度的土壤溶液。

3、涂布培养：

0.00001、0.000001浓度的土壤稀释液作为涂布平板培养的对象，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基中，共6个培养基，标号，37°c温箱培养48h。

4、选取目的菌株：

两天后对土壤溶液的微生物培养基进行观察，并取两个菌落形态完全一致的分散的单个菌落，对其中一个喷洒卢戈氏碘液，观察其菌落周围是否出现透明圈，如果出现透明圈说明此菌株产淀粉酶，是目的菌株，记录细菌明显的性状。

2022生物比赛心得体会和感想五

一、对课本内容不够纯熟。这是我一开始就注意到的缺点，因而在假期里，我特意将课本看了一遍，但偶尔也会出现个别知识点没讲的错误。

二、对实验的处理。

生物学是一门实验性很强的学科，生物书本上也分布了很多个大小实验，但我们学校这一学年的情况有些特别(实验室前些时间没搞好，没有实验员且课时不够)，故而面对大部分的实验，我都只能讲过，而不能让学生动手去体会。我本身是一个较认真的人，没让学生做实验，我总觉得对学生有所亏欠。

三、对个别有潜力的学生没有做好引导。

一个学年匆匆地过去了，随着学生对生物学知识的积累，我也渐渐地成长。一个学年过来，我觉得自己学到了很多，积累了很多经验。在下年里，我会继续发扬我的优点，弥补我的不足，以求做得更好。

初中生物新教材学生课堂实验共37个，这充分体现了生物教学大纲指出的“生物学是一门实验科学，观察和实验是学习生物科学的基本方法。”努力创造条件，结合学生心理、生理特点，克服困难，完成大纲、教材规定的课堂实验教学，培养学生的能力，发展智力，提高学生素质，提高生物教学质量，是我们生物教师的责任。自己经过三年的初中生物实验课教学实践，谈几点体会。

1、明确实验目的，激发学生学习动机。

心理学告诉我们，目的是人采取行动的结果，而动机则是激励人去行动的动力。学生明确实验目的，自觉地产生动手实验的内部动机，实验效果就会很好。但是初一、二年级学生好奇、好动，对实验陌生。有的学生认为上实验课好玩，缺乏科学态度，有的学生认为升学不考，学习目的不明确，这些都给实验课组织教学带来一定困难。因此实验前除要求学生明确教材上的实验目的外，还要明确该实验在生产、生活等方面的实际应用。如上显微镜使用一课时，提出医生对贫血、癌症等疾病的诊断，除看、问、查以外，还要通过化验，用显微镜、电子显微镜等对病人患病部位的细胞组织等进行病理诊断，才能得出结论。没有科学手段会使病人误诊，严重时会危及生命，造成不可弥补的损失。同时介绍显微镜在工、农、医学方面的广泛应用，以此激发学生学习动机，树立科学态度，提高学习兴趣，这样有利于克服组织教学难的问题。

2、指导学生掌握实验步骤的方法，规范操作。

实验步骤是学生动手规范操作的要领，只有理解、掌握才能规范操作，实验才能成功。因此实验前指导学生预习，将实验步骤由繁化简，抓住每一步的关键词语串通于实验步骤之中可以收到好的实验效果。如显微镜使用过程中的“三个一”:一、安放距桌边一掌(5-7cm);二、对光要目(目镜)物(物镜)通光(通光孔、光源)一直线，光强用平面镜，光弱用凹面镜;三、观察时标本对孔正中距离物镜一厘米，视野中出现标本颜色或杂质时观察目标即将到位，微调粗旋镜升降，细旋校象清晰，找不到目标时缓缓移动玻片标本即可找到。教师规范操作一步，边讲该步的注意事项，边让学生模仿操作一步，教师巡视，及时表扬规范操作快而且准确的学生。纠正错误操作，如用左眼观察时，纠正学生用右眼观察或闭着右眼的习惯，转动转换器时，纠正扳物镜的错误操作。这样学生很快对好光，观察到标本在视野中的图象。用完显微镜擦干净外表。转动转换器，把物镜偏两旁，放回镜箱原处。制作临时装片的实验，先将擦→滴→取→展→盖→染的实验步骤写在黑板上，让学生看书了解每一步的涵义，圈上关键的词语，教师再讲每一步的涵义及注意的问题，边操作边叫学生模仿操作。然后强调注意事项。滴一滴清水，太多易外溢，太少易出现气泡。取材薄而透明透光易观察，展平防重叠，轻盖防气泡。气泡与细胞的区别，气泡圆边厚黑，中间亮白，轻压变形。这样学生很快掌握步骤、要领，在显微镜下观察到自己制作临时装片中的细胞，认识细胞壁、细胞质、细胞核(细胞膜紧贴细胞壁，在光镜下看不见)，然后绘出细胞结构图。这样学生就达到了实验的目的要求，兴奋不已，终生难忘。

3、指导学生观察实验现象。

学生在实验过程中规范操作是进行实验的基础，而对实验现象的认真观察，是达到实验的目的、探索实验结果的关键。但学生在实验中往往重视操作，忽视观察、分析。如在解剖鲫鱼的实验过程中，学生认为解剖完了，实验就做完了。针对这一问题，我在实验前编好实验指导，要求学生预习实验时准备好硬纸板，在一定的位置写上鲫鱼各器官、系统的名称。做解剖鲫鱼实验时，先让学生观察鱼的各种鳍在游泳中所起的作用。然后，按步骤规范操作解剖，将观察后的器官，系统解剖放在硬纸板写好的相应位置上，并在实验指导的空白处填上相应的结构及功能，教师检查评分。我在下一节课前5分钟小测验，结果181名学生有160名均在90分以上，其余在80分以上。这样通过学生动手、动眼、动脑、观察、分析思维，培养了学生认真的科学态度，掌握了知识，提高了能力。

4、对教材要求掌握、难度大的实验进行考查。

我在班上进行了实验考查，如用显微镜观察植物细胞，探究种子成分，鲫鱼的解剖等。在上完植物的基本结构后，对用显微镜观察植物细胞的实验进行考查，这个实验既考查了显微镜的使用，又考查了临时装片的制作，也考查了对细胞结构的认识，为后面的生物实验打下基础。我参照了高中毕业生物实验考查《显微镜使用和临时装片制作》的方式及评分标准，三分之一的学生在5分钟内完成，评90分以上;多数在8分钟内完成，评80分以上;极个别的学生在教师指导下完成的，评60分。这样通过实验考查，促使学生认真预习、复习、动手操作。对实验操作差的学生及时发现，加强个别辅导，做到人人过关。这样克服实验仪器少、学生多、难于动手的矛盾，提高了学生对学习生物课的兴趣。综上所述，通过实验教学，培养了学生学习生物科学的基本方法，认真的科学态度，发展智力，提高了学习生物的兴趣，从而提高了生物教学的质量。

通过几年的生物实验课教学实践，我体会到生物实验课对提高生物学科的教学质量能起到很大的促进作用。自己决心将实验课的改革，继续深入进行下去，全面提高学生素质，提高生物教学质量。

2022生物比赛心得体会和感想六

1.1学校的目的：

让我们在工厂里品尝到从未有过的苦头，也将学校里学到的理论知识和实验操作技能灵活地应用于寒假实习工作中。

1.2对我们成长的意义：

使我们明白在学校学到的东西要拿到社会上来用是远远不够用的，也不能解决一切问题。来到社会进行实习工作后，才理解社会为什么不像在学校那样单纯、简单。但是，对于科研方面在学校就要求比较复杂，而工厂的生产就讲就越简单越好，尽量节约科研的成本。

2.1**生物科技有限公司：

位于南宁市江南区吴圩明阳工业园，公司主要从事速生杏鲍菇培育，现将建成一间种菇房，面积约1200平方。

2.2他们的主营产品、服务、类型、成就：

速生杏鲍菇。该企业的虽然属于股份制有限责任公司，但是它却是拥有1000 万元注册资金的种苗生产型行业。那公司法人代表张生新负责用50名员工就开动了公司基础建设和初步运作。该公司在南宁市江南区吴圩镇出生于20xx年4月5日。

3.1实习的岗位：

在半个月的实习工作中，40%的时间里我是一名培养基配制员，50%的时间内我在进行的是隔菌盖的组装工作，还有10%的时间是用于干杂活。

3.2多样的工种：

接种员主要负责将试管里的菌种接入装有培养料的瓶中，并要求严格按照技术规程操作甲醛对接种室进行周期性循环杀毒灭菌。灭菌锅操作员主要负责受污染菌瓶的处理和无菌接种工作前的操作准备（对操作工具和培养基的灭菌）。

4.1配制种子培养基过程的工作。

（1） 准备好三个大水桶，并且装满水。

（2） 洗干净一个大盆、簸箕和一定数量的培养瓶备用

（3） 按配方，取定量麦粒等培养料，放入大锅里进行煮，直到用手捏时感到柔软即可。（水来源于其中一个大水桶）

（4） 将煮好的麦粒，倒入簸箕沥部分水就可倒入大盆，再加入定量的麦皮、木糠搅拌均匀，然后加清水达到适合湿度（用手捏一把时有水滴出），最后用石灰调整ph值（ph=7左右）。

（5） 选取质地形状规则的木条，放入一个加有石灰的大水桶（ph=7.5左右）中浸泡一个晚上后，倒去水就均匀撒上木糠备用。意味着当天所用的木条是昨天准备的。

（6） 先将25根木条平整放入培养瓶的一边，在向培养瓶空的一边装填培养料与木条齐平，擦干净瓶口后装上棉花塞。

（7） 装入灭菌锅里，进行食用菌培养基规范灭菌（0.5mpa时，排除冷空气；1.1~1.4mpa时，维持120~180分钟）。

4.2无菌操作：

（1）做好接种前的准备：

a、 在超净工作台外用75%的酒精或新洁尔灭将所有的材料瓶体擦拭一遍。

b、 将接种铲和接种锄用75%的酒精或新洁尔灭消毒后再用酒精灯灼烧灭菌。

c、 先用75%的酒精或新洁尔灭认真擦洗，尤其是手指、指缝和指甲。

d、 用75%的酒精或新洁尔灭擦拭工作台。用75%的酒精或新洁尔灭喷湿纱布或毛巾，准备擦拭工作台，先用湿纱布或毛巾擦拭工作台的过滤网。再就是工作台内的顶部，然后是两侧玻璃，最后是工作台的不锈钢台面。擦拭工作台必须按照一个方向进行。

（2）接种过程操作及后处理：

将灭菌后并冷却的接种铲和接种锄交换使用，从试管中取出菌种植入培养瓶中，再盖上棉花塞（此过程中，瓶口和棉花塞都要略微过一下火焰）。此外，接种过程中接种人员双手不能离开工作台，如果手离开台面拿培养基或材料时，再重新接种前先用75%的酒精或新洁尔灭擦拭。台面不要堆放太多待用的培养基或材料，人员尽可能少在其中走动，在接种时不能闲谈。

接种完毕后，把工作台清理干净，关闭各自工作台及电灯灯等室内所有不需要用的电器电源，将接菌瓶、接种日期、接种人员代号等标记清楚，并全部送到培养室记录，当天值日生必须将培养室和接种室及门前过道清理干净。

将所有使用过的培养瓶放置于指定的位置，把接种时废弃的培养基和材料统一倒入专用垃圾桶，清洗接种器具，晾干待用。

5.1在思想、道德和纪律方面：

我服从管理人员的工作安排和技术指导，吃苦耐劳、勤奋工作、团结同事；严格遵守公司的管理办法并按照各种操作流程进行操作；团结友爱、尊重同事、不做假、对工作不抵触，也不在培养室内吃东西；在公共场所举止文明、待人和善，爱护公司财产、节约水电等各种消耗物品的使用，杜绝浪费。

5.2在专业学习方面：

增加了我对《食用菌》这门过时学科的了解并向外拓展了新的知识并收获了宝贵的经验。

配制种子培养基过程时，我了解到了前期的准备工作十分重要，今日如果有工作遗漏将会严重影响下一天的工作进程。食用菌种子培养基的灭菌温度和时间与我们在实验室时对微生物和植物培养基，有些不同。如果灭菌不彻底绿色木霉、链孢霉、毛霉、曲霉、青霉、酵母菌会对杏鲍菇产生致命的危害……

5.3在实习工作的生活方面：

我是一个时间观念比较强的人，工作时间基本和生物钟同步进行。因此，我也感觉到了自己每天好像都在做着同一件事，不过也正是因为这样我才有规律性的工作生活节律。

我认识到了在实习中我所从事的工作是多种多样的，而又是食用菌培养技术实验生产化一系列的工作布局。这也是在让我从实习中进一步的认识到学科知识和技能在社会生产上的应用，还明白了我们不再是为了成绩而学习知识，而是为了创造而学习知识。食用菌培养技术只不过是生物技术对植物某方面的一个应用，另一大方面则应用于微生物，当然还有应用于动物那样高层次的基因工程。接种时，都要在相对无菌的环境下才能进行，原因是细菌的生命力比真菌的生命力异常强大，直接可以污染致死真菌。

6.1记忆的轮回：

回想在这段光辉岁月的实习的道路中，我虽然吃了不少的苦，但是我还是满载着经验和知识归来。

6.2崭新的突破：

我明白了本专业培养目标是培养掌握生物技术及应用专业必需的基础理论知识和基本技能，从事生物技术产品开发应用、检验分析、技术监督、生产管理等工作的高级技术应用性专门人才。 认识了本专业核心能力是生物技术产品开发和应用。

6.3未来的希望：

理解了本专业核心课程与主要实践环节是生物遗传学、生物化学基础、细胞生物学基础，、分子生物学、基因工程、生物制品分析测试、现代生化技术、仪器仪表施用及养护、发酵工程设备、化学和生物学实验、生产实习、野外实习、毕业实习、毕业设计等，以及各校的主要特色课程和实践环节。了解了就业面向是工业、医药、食品、环保等企事业和行政管理部门，从事生物技术产品开发、生物制品分析测试、生产管理和行政管理等工作。

7.1辞旧迎新：

本生物技术及应用专业知识每时每刻都在更新的，所以我们不能满足和局限于从课本上学到的知识，更要从百度大神、学术期刊网和ncbi中获得最新、最潮流、最时尚的生物技术及应用的相关知识、成就、产品。

7.2培养人才：

虽然说我们我专科生的教学是理论和实验各占50%，但是我感觉实验课程实在太少了，而且又做不到自由发挥，感到总是被套着做实验，没有创新。这当然不是老师的教学问题，只是我们平时不去关注生物技术相关资料而没有创新意识。理论知识教学不够生动形象，有时难以理解而感受到枯燥乏味，这个本质的原因还是我们的基础知识不够牢固，得靠自己上网自学来补救。

7.3内因外患：

内在因素是主要原因，但是一个巴掌拍不响，所以外在因素也是不可以小瞧的。系里面开展一些课余活动是有益于我们学习和生活的健康发展，但是过于开展第二课堂活动就荒废了我们正常的学习与生活，最后只会变得筋疲力尽、寸步难行。

7.4物极必反：

我的建议是开展活动要保证其质量，而不是其数量。并且要建立在不影响我们正常学习和休息的时候，要不然会使我们在大学中盲目不知道学习与活动孰轻孰重。虽然在活动中我们也可以学到许多东西，但是那些几乎都是综合能力的知识，真正本专业的知识还是的从教师的课堂来。而且现在社会分工是越来越细，对专业知识人才的需求量绝不会少于综合能力的人才。

7.5泛而专一：

我对本专业的专业知识、课程结构想法是泛而不失专一，即是不仅要广泛的学习，又要专攻一门将来想要发展的学科。原因是《微生物学》使我明白自己有时还不如微生物，因为它们从来不会做无用功；教《生物化学》的爱爱老师让我们领略到了手媒体的美妙；《发酵技术》教会我们利用微生物吃垃圾而产奶；教《生物分离纯化》的领导，是我们体会到了精品课程的上课模式；《植物组织培养技术》使我们有能力保护濒临灭绝的植物……

8.1自我反省：

在实习工作中，我发现自己还存在好吃懒做的问题。本想找出多余的自由时间放松一下，但又不按时按不量的完成本职工作；本想取得主管的信任，但又不认真不努力工作；本想和同事搞好工作关系，但是自己在工作中又特立独行。

8.2面向未来：

那在今后的日子里，我要以身边优秀的人物为榜样。不懒惰，主管下达的任务要立即完成，不能拖延。不推辞、不推脱难以完成的任务。竭尽全力完成自己的本职工作后，也争取做一些自己力所能及的事务。就算那要花掉自己的业余时间，那也在所不惜。

8.3敬岗爱业：

不要偷工减料，认真的完成主管安排的每一项工作，并保证其质量合格。无论客户对苗木品种要求如何，我一样态度为他服务；无论客户贫富贵贱，我都以一样的心态热情对待；无论客户的要求多么苛刻，我都会尽力做得更好。

8.4相互理解：

俗话说，在家靠亲人，在外靠朋友。多一个朋友，总比多一个敌人好。所以，在未来的工作生活中，我要尊重他人的人格尊严，有好的宽容的对待别人。在竞争中合作，才能让我有更高涨的热情投入于学习和工作去。

8.5春暖花开：

我总是特立独行、沉默不语，导致了我还对许多实习的工作细节不是十分的明确和清晰。所以，在未来的实习日子里，我应放下胆子、大胆提问、主动出击、积极工作。

2022生物比赛心得体会和感想七

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh 1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2 和mg2 等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。