生物复习课培训心得体会报告 生物中考备考培训心得体会(六篇)

我们在一些事情上受到启发后，应该马上记录下来，写一篇心得体会，这样我们可以养成良好的总结方法。那么你知道心得体会如何写吗？下面小编给大家带来关于学习心得体会范文，希望会对大家的工作与学习有所帮助。

推荐生物复习课培训心得体会报告一

一、 复习阶段

第一阶段：基础知识的复习

以章节为单位，旨在帮助学生对学过的知识进行梳理，编织严密的知识网络。自己在上课前根据进度先做好学案，学案大致包括四块内容：复习目标、知识梳理、典例解析、达标检测。知识梳理的内容根据每一章的内容和考点把知识分为几个学习任务，典例解析可以从历年的中考题中来选或者再挑选一些与社会生活联系比较紧密的题目让学生分析讨论来总结出解题的一般规律以及解题方法。达标检测的题目可以选一些比较典型的题目。具体时间安排：让学生了解复习目标一般为1到2分钟，知识梳理为20分钟左右，典例解析为5-6分钟，达标检测15分钟左右。

第二阶段：专题复习

生物学业水平测试是初中生物的综合测试，是对初中生物学知识的一次大检测，因此，理清初中生物学的知识脉络，对学生进行综合训练，是提高学生综合素质的重要过程。所以在第二轮复习时，我把知识分为五个专题：专题一细胞 生物 生物圈;专题二生物圈中的绿色植物;专题三生物圈中的人;专题四物种的延续;专题五生物圈中其他生物和生物多样性。这一轮的复习主要以“报纸”为主要复习资料，另外再给学生收集一些适合本年度生物学知识的热门问题(如健康、环保、食品、能源等)，联系生活实际，精选和精编习题，着重训练学生分析问题和解决问题的能力。

第三阶段：综合模拟训练

这一阶段没有很多的时间，重在根据学生不同的情况开展自我复习，进一步夯实重难点、考点，并树立坚定的自信心，以饱满的意志力与100%的自信进入考场。我打算参考近几年中考试题和中考模拟试题

以及再精心收集和编排一些比较能反映社会热点的题目编制出三套高质量的模拟试题，通过模拟训

练查缺补漏。

二、 复习措施

1、坚持理论联系实际，加强与班主任、其他任课教师和学生的交流，及时掌握学生的学习动态。

2、复习中运用灵活多样的方法，如“一章一练一结”。及时总结教改教研成果。

3、认真学习先进教育理论，解放思想，实事求是，用科学的教育理论、方法来提高生物教学水平，做教育改革的先锋。

4、以教材为本，努力做好课前的准备工作，精选、精编复习题。

5、讲：串讲知识要点，梳理知识脉络，构建知识体系，强化记忆，拔升能力

6、练：精选精练，要求对每个知识点都力求重现一次，达到巩固知识的目的。

7、评：针对性的评讲，“打蛇要在七寸，用钢要在刀刃”，突出重点，突破难点，强调得分点，同时由个到类，培养发散思维能力，

8、结：没有总结，就不会有能力的提升，仅仅只是知识的再现，遇到新材料，新情景的题就会不知所措，因而让学生掌握解题的方法和技巧，培养正确的思维习惯很重要。

9、复习中注重基础性、系统性和趣味性。从学生掌握的角度出发，将教材的知识体系加以归类、梳理，形成网络，将知识融会贯通，从而达到培养学生自主学习的能力和创新精神的目的。

推荐生物复习课培训心得体会报告二

让学生在合作和探究过程中真正体验学习的乐趣,从而进一步激发学生学习兴趣,逐步养成学生热爱自然、关注生命、关注社会发展的责任感。在此基础上,发现并培养学生的个性和特长。

一、指导思想

深入贯彻学习《基础教育课程改革纲要》精神,以《全日制义务教育生物课程标准》为依据,遵循学生身心发展特点和教育规律,面向全体学生,着眼于学生全面发展和终身发展需要,以提高学生的科学素养为宗旨,以培养学生的创新精神实践能力为重点,倡导自主、合作、探究性学习,以促进学生转变学习方式--变被动接受式学习为主动探究式学习为突破口,在教学过程中引导学生主动参与、乐于探究、勤于动手,逐渐培养学生收集和处理信息的能力,提出问题、分析和解决问题的能力,以及交流和表达能力。让学生在合作和探究过程中真正体验学习的乐趣,从而进一步激发学生学习兴趣,逐步养成学生热爱自然、关注生命、关注社会发展的责任感。在此基础上,发现并培养学生的个性和特长。

二、教学目标

通过义务教育阶段《生物学》(八年级上册)课程的学习,逐步实现以下发展目标:

(一)知识与技能:

1、认识动物的主要类群及其对环境的适应性特征。

2、了解动物在自然界中的作用及其与人类的关系。

3、了解细菌和真菌的主要特征以及与人类的关系。

4、通过活动体验生物的分类是根据不同生物的形态结构特征上的相似程度来进行的。

5、了解生物的多样性及其价值。

6、培养学生的实践操作能力和实验设计能力。如:进行"饲养和观察蚯蚓"、"调查动物在人们生活中的作用"、"检测不同环境中的细菌和真菌"、"制作甜酒"等与日常生活密切相关的活动。

7、培养学生收集和处理信息的能力,丰富学生获取知识的渠道,拓展学生的知识面。如:进行生物学相关信息资料的查询和收集。

(二)过程与方法:

1、期初"三个一":订一个奋斗目标、找一个互助伙伴、提一条教学建议。采取"目标激励、同伴互助、师生共勉"的教学策略,增强主动性,密切合作性,促进师生共同成长、可持续发展。

2、每堂"三个一":提一个学科问题、记一个知识结构、出一份测试试题。着意培养学生提出问题的能力、归纳能力和自我检测能力,将课堂学习的主动权尽可能让渡给学生。

3、注重学法指导,教会学生如何学习。如:

(1)问题导向法。指导学生按照"生物有哪些形态结构特征?如何适应环境?与人类的关系如何?"等基本问题自主学习、自主解答、自主测试、自主反馈,辅以同伴互助和教师点评,让学生掌握自主学习的方法、形成自主学习的能力。

(2)实验探究法。让学生进一步熟悉"提出问题--作出假设--制定计划--实施计划(实验操作)--得出结论--表达交流和反思"的科学探究的方法流程。

(3)理论联系实际法。指导学生学会运用学到的生物学知识来解释日常生活和生产劳动中所遇到的生物学现象,提升学习兴趣,激发学习热情

加深对书本知识的理解,做到知识源于生活,学以致用。

(4)识图学习法。新教材图文并茂,形象直观,可读性强。引导学生学会看图、读图,可以促进学生对教学内容的直观把握和理解记忆。

(5)比较法和归纳法。引导学生通过对知识的比较和归纳,找出知识之间内在联系,理顺知识脉络,学会归纳概括和总结,形成知识结构,加深理解记忆。

(三)情感态度及价值观:

1、认识生物多样性的价值及保护生物多样性的重要性,树立人与自然和谐发展的观点。

2、了解生物科学技术在人们生产生活方面的重要作用和实践价值,激发学生的学习兴趣、投身生物科技的热情以及促进社会进步的使命感。

3、了解科学技术在促进人类进步的同时,往往带来人们预想不到的负面影响,认识科学技术是把双刃剑,善用可以为人类造福,滥用则会贻害无穷,确立全面的、辩证的技术观和价值观。

三、学生学情分析

一方面,经过七年级一个学年的学习,学生对生物学知识有了初步的了解,对生物学习的方法有了初步的掌握,具备了一定的生物基本知识、生物实验技能和实践操作能力,不少同学还对生物学有着浓厚的兴趣,为八年级的生物教学打下了较好的基础。

另一方面,不少学生在学习过程中仍然存在目标不明确、自制力不强、主动性不足等问题,具体表现是学习习惯懒散、注意力不集中、不按时完成作业,好奇心有余而自觉性不足,学习成绩存在两极分化的趋势。

因此,从本学期开始,在进一步激发学习兴趣、加强课堂管理和调控的同时,要注意加强学习思想引导、学习方法指导,特别是学习过程和效果的监控,不仅要让端正学生态度、学习得法,还要促使学生养成课前预习,课后及时巩固、持之以恒的良好习惯,力求使每个学生都有明显的进步,学习成绩有大面积的提高。

四、教材分析

八年级上册《生物学》内容包括:第五单元《生物圈中的其他生物》共五章,第六单元《生物的多样性及其保护》共三章。教材的编写注重从生活实践出发,广泛联系学生的生活经验和知识基础,把握基础性,体现先进性;内容编排图文并茂,加强了启发性,具有较强的可读性;栏目设置丰富多样,注重创设问题情景,突出科学探究能力的培养,重视科学态度、科学方法和科学价值观的教育;内容编写具有弹性,给学生更多的自主学习空间,较好地体现了新课程标准的基本理念。

本册书的第五单元《生物圈中的其他生物》与七年级的《生物圈中的绿色植物》、《生物圈中的人》同为《生物圈》的重要组成部分,《生物圈的多样性及其保护》离不开生物圈中的绿色植物、人、动物、细菌和真菌等有机组成部分的和谐共存,前后内容之间有很强的关联性。因此,在教学过程中,既要要注意类别知识的横向对比,又要注意结构知识的纵向梳理,还要注意基本知识的多向迁移,搭建过渡桥梁、构建知识网络,力求做到形散神聚、融会贯通。

五、基本措施

(一)备课标、备教材。

认真钻研新课标和教材,明确教学要求,把握教学的重点和难点,明确本单元本节课在整册教材中的地位,弄清知识的内在联系和规律,全面深入理解和掌握教材内容,同时挖掘教材固有的思想教育因素,寓思想教育于教学过程之中。

(二)备学生。

深入了解学生思想实际和知识、能力水平,充分估计学生接受新知识可能遇到的问题。根据学生认识的发展规律和心理发展特点,精心设计教学程序和教学方法。

(三)备教法、备学法。

根据课程标准、教材内容和学生实际,瞄准教学目标,灵活采取自学指导法、谈话法、演示法、实验法、多媒体辅助教学法等手段,不断优化教学方法,提高教学效率。同时,根据教学内容不同,指导学生采用自主学习法、合作学习法、实验探究法、小组讨论法、问题发现法、检测反馈法,积极主动地参与学习过程,提高课堂实效。

(四)备作业。

注意控制好随堂练习和课后作业的量,结合考点、突出重点、精选习题,把握好训练的质,除了少数课后实践性的作业之外,其他知识性书面作业尽可能当堂完成、当堂批改、及时反馈,减轻学生的负担,提高作业的效果。

(五)备教学流程。

精细设计教学流程,在教学过程中需要为学生自主学习做好引领,为探究性学习创设情景,鼓励学生多观察、多思考、多提问,注意知识教学、分组实验和实践活动相结合,加强对学生基本实验技能的培养。

推荐生物复习课培训心得体会报告三

生物学是一门实践性很强的学科，我们在经过了将近一年对动物学和植物学的理论学习后，野外实习也至关重要，它可以使我们更加有效地掌握和巩固课堂教学的基本理论知识和基本实验技能，而且还可以学到许多在课堂上学不到的知识，开阔视野，认识人与自然的关系，增强环境保护意识和社会责任感。

（1）复习、巩固和验证所学的生物学基本理论和基本知识，同时进一步丰富所学的生物学知识；

（2）用辩证唯物主义观点观察丰富多彩的生物世界，了解植物和动物的形态、习性、种类、用途的多样性以及它们与环境的关系，激发学习的积极性；

（3）理论联系实际，通过自主学习和研究性学习培养独立工作能力和创新意识；

（4）培养不怕困难，吃苦耐劳的好作风热爱祖国的山山水水，珍惜大自然一草一木的良好素质与情感；

（5）增强集体主义观念弘扬团队精神，促进同学，师生之间的了解与沟通。

（1）通过野外实习，我们不仅巩固了书本上学到的知识，而且还学到许多在书本上学不到得知识；

（2）通过野外综合学习，我们更加热爱自然，热爱专业，团结合作，吃苦耐劳，同时也提高了独立观察、思考、分析、解决问题的能力和探索创新的新能力；

（3）通过野外实习，增强了我们对植物界生物的认识，认识了人与自然的关系，增强环境保护意识和社会责任感。

5月29日，早晨五点集合，出发赶往青岛，下午一点左右到达参观青岛市中山公园的动、植物园，下午2点10分集合，晚上进入北九水风景区。

5月30日，上午在山里采集标本，下山后按小组制作标本，下午去樱桃园采摘樱桃。

5月31日，挑战崂顶，6点40出发，中午12点左右到达崂顶，围山顶走了一圈后开始下山，下山时由于方向性错误我们在深山里迷路了，还遇上了大雨，幸亏遇上了几名野外登山队员，才得以走出这座鬼斧神工的大山，到达营地时已经晚上7点多了。

6月1日，早上8点多，在青岛栈桥看风景，9点到下午2点在海底世界参观标本及各种海洋生物（标本馆、海底世界、海兽馆、梦幻水母宫）下午两点多向日照出发，来到李家湾赶海园，住在海边，心情无比激动。

6月2日，上午来到灯塔风景区和万平口风景区看大海，下午回到营地赶海，采集和制作标本。

6月3日，上午来到国家森林公园观赏各类植物，下午回到营地采集和制作标本。

6月5日，上午自由活动，下午1点去刘家湾赶海园赶海，采集和制作标本，这里的海滩好大呀。

6月6日，上午7点出发赶往济南大明湖公园参观游览，下午出发返回，晚8点抵达沧州，野外实习顺利结束。

首先，我觉得这次去山东，可以说是不负此行吧，我们不仅开阔了眼界，领略了大自然的神奇与奥秘以及大海的广阔与浩瀚也品尝了正宗的山东煎饼，感受到了山东人民的淳朴与热情，切身体会了山区人民和沿海人民别有一番风味的生活格调，山东的确是个好地方，尤其是青岛，气候适宜，景色怡人，08奥运会时，帆船，游泳等4项就是在这里举行。

最难忘的还是爬崂顶的那一天，我们一大早就出发，虽说只走了几段山路，但由于天气炎热以及一路上坡，到达崂顶时我们个个都是汗流浃背，但当我们站在索桥上看到眼下的壮丽山河时，还是激动的大喊大叫。我们绕崂顶走了一圈，参观了各个景点后，便开始准备下山，我们本打算走到虔女峰时抄小路下山，却不想走错了方向，三四个小时后，出现在眼前的却是一条干涸了的大河，河里都是锋利的大石块，大家都傻眼了，这时我们已有几名队员受了轻伤，幸好这时我们遇到了四名野外登山队员，他们对当地地形比较熟悉，我们才得知我们离营地已经很远了，若原路返回太阳下山后山路难行，于是我们决定跟随登山队继续前行，赶往大河东，经过几个小时崎岖的山路后，我们终于到了大河东，这时我们几乎已经弹尽粮绝，我和另外三名同学分吃最后一个石头饼，石头饼第一次没有弄疼我的牙，我们四处打听，坐公交到了恒星学院，这时天已下起大雨，打通电话后，我们终于等到我们的车把我们接回营地。通过这件事，我才发现原来我们每个人的力量都是不可估量的，在特殊时刻，我们才能将它们发挥出来。

这八天，我们不仅游览了祖国的名山大川，还认识了各种动植物，虽然条件艰苦，但是受益匪浅，同学们得关系也更加密切。更重要的是，这次野外实习，我们真正的走进了大自然，领略了大自然的神奇与奥秘，生物真的是一门很有趣的学科，我们只有好好学习它才能和大自然更加和谐的相处。

推荐生物复习课培训心得体会报告四

综观近几年高考理综化学试题，总的讲试题难度不大，体现了源于课本，但知识覆盖面大。因此，高三化学总复习必须坚持三到位：即基础知识到位、逻辑思维到位、分析问题和解决问题的能力到位。而第一轮复习阶段是对学科基础知识的复习和整理，使之系统化和深化，把握学科基本知识的内在联系，建立学科知识网络。复习内容要细致全面，即达到知识上不留死角的目的。

以化学知识块、教材章节、方法与技能相结合的方式整合教材，形成单元，按概念和理论(一)—— 无机元素化合物 —— 概念和理论(二)—— 有机化学 —— 方法与技能(强化)的主线组织单元复习，将计算和实验融合、穿插到各单元中。此整合教材组成单元复习的方法，能有效地感受知识的内在联系和规律，形成完整的知识结构和网络，促进能力的培养和提高。

第一轮复习注重基础要突出教材。认真阅读、梳理教材，挖掘教材(特别是高三选修教材)中实验和习题的可变因素(如不同的方法完成同一实验或同一方法完成不同实验、一题多解和变式练习等)，进行深入地理解、应用，夯实教材中的基础知识、基本技能、基本方法和基本题型。注重教材章、节之间知识内在联系、规律的揭示，形成知识结构和网络。如无机元素及其化合物知识(内容多、涉及面广，往往死记硬背，不易掌握)，复习时应以元素周期律的性质递变规律作为知识主线，以化学基本理论作为知识网络，帮助学生理解、掌握相关内容，形成相应的知识结构和网络。即根据物质结构和元素周期表，逐一地判断某主族元素及其化合物的通性，同主族元素或同周期元素性质的递变规律;根据强弱电解质理论推知一种盐的水溶液是酸性还是碱性;根据离子反应发生的条件和金属活动性顺序或非金属活泼性顺序，推测某一反应是否发生;根据化学平衡和勒夏特列原理，知道如何促进或抑制某一反应的进行等。重视高中教材中的阅读材料、常识介绍，它们往往是高考考查的盲点。

要注重化学主干知识，突出复习重点。高考要求的化学主干知识为(25条)：

(1)原子结构(2)元素周期律、周期表(3)分子结构、晶体类型(4)化学反应与能量(热化学方程式)(5)反应速率与化学平衡(6)电解质溶液(ph、离子方程式、水解、电解等)(7)氧化还原原理的应用(8)典型的非金属卤素(9)氧族元素(10)氮族元素(11)碳族元素(12)碱金属(13)镁铝铁(14)同分异构(15)烃及其衍生物(16)糖类、蛋白质、油酯(17)有机合成材料(18)物质的量及计算(19)化学式和结构式计算(20)方程式计算(22)化学实验常用仪器及操作(23)实验室制法(24)物质的检验、分离、推断(25)化学实验设计

要注重规范、落实细节。“细节决定成败”,书写和表达的正确、规范，决定高考的成败。要加强化学用语的落实训练，充分利用课堂教学和作业练习，强化化学方程式、离子方程式书写的配平;强化有机化学方程式书写的小分子不掉;强化有机结构式、结构简式书写中c-c键、c-h 键、c=o键、苯环的到位;强化官能团位于左边的正确书写(有的教师要求学生每堂化学课坚持默写5—10个教材上典型的化学方程式、电子式、有机反应式、官能团结构简式等，不失为一种行之有效地落实办法)。要训练培养尽量用化学语言(化学式、化学方程式)进行准确、完整、简洁地表述。要严格化学计算的步骤，要求运算准确，有效数表示规范。

思维能力是化学学科能力的核心，复习教学要注重发展思维。精心设计化学实验、化学问题创设复习教学的情景，积极思维，对知识的梳理、归纳、总结要按知识结构的框架自己完成;对例题的分析、讲解，要有充分思考的时间和空间，注重分析思路，寻找解题的突破口;要精心选择记忆模仿、迁移应用、推理创新、空间想象、评价最优、快准计算的练习题，训练和发展思维，提高思维能力层次。

要突出化学复习方法的指导。第一轮复习应在通读、精读教材的基础上梳理、归纳知识，按教材中每章小结的知识网络图形成本章的知识结构;将教材章与章之间的知识网络按知识的内在联系和规律，形成中学化学学科的知识体系和网络，以便应用时能快速、准确地提取相关知识，解决化学问题。要用“结构——位置——性质”、“原理——装置——操作——现象——结论——分析——评价”、“类比、逻辑推理”、“实验探究”、“建模思想(将化学问题抽象成为数学等量关系，运用数学方法解决)”等化学学习方法，复习掌握化学知识，提升学科四大能力。

要强化解题能力的培养。精心选择近几年的高考理综化学试题作为典型题(五年高考三年模拟)进行分析、训练，加强审题方法、解题思路、解题技巧的指导和总结，加大练习力度(精练、巧练，防止低层次的重复练习。)，严格答题要求，及时反馈、矫正，使解题能力的培养、提高落实到位。

能力培养要循序渐进逐步到位。第一轮复习应根据掌握知识的情况，多穿插一些小专题，侧重训练、提高某种单项能力，如：离子方程式书写、离子共存、离子浓度大小判断、热化学方程式书写、无机元素化合物性质推导、化学计算基本方法(一、二、三、四)、化学实验中的实验原理设计、仪器设计、操作方法设计、有机同分异构体推导(限制条件与不限制条件)、有机分子式确定、有机官能团推导等等。对于多种能力的综合训练，第一轮复习不可涉及过多，以免要求太高，一时达不到，挫伤学习积极性。

“纲”是理综高考化学《考试大纲》，“题”是理综高考化学试题，要加强新课程理科综合《考试大纲》和理综高考化学试题的学习、研究，用《考试大纲》和高考化学试题指导复习，把准方向，增强复习的目的性、针对性、有效性。

要明确新课程理科综合考试化学科的特点、内容和要求，对新课程不作要求的内容(如电离度、二烯烃、平衡常数、卤化氢和二氧化硫的实验室制法、硫化氢的性质、实验室制法等)，复习不要涉及;对新课程增加的内容(如化学反应中的能量变化、热化学方程式、重要的氧化剂、还原剂、臭氧、过氧化氢、常见的生活环境污染和防治、原料与能源的合理利用、无机非金属材料、化学实验方案的设计等)，要特别关注。

要明确理综高考化学科四种能力(观察能力、实验能力、思维能力、自学能力)的具体要求，研究理综高考化学试题如何通过化学知识为载体，考查学科能力;研究采取哪些措施，达到高考要求;做到能力培养心中有数，学习有方。

要充分考虑可接受程度，控制好难度和容量(知识容量和思维容量)。练习要以中挡题为主，要紧扣基础，不回避常见题(高考都不回避常见题)。对一些资料上超纲超要求的偏题、怪题，要大胆放弃。要注重题上“开花”(举一反三)，以一当十。

推荐生物复习课培训心得体会报告五

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1．还原糖的鉴定原理

生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。斐林试剂由质量浓度为0.1g／ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／ml的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的cu(oh)2沉淀。cu(oh)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的cu2o沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：ch2oh—(choh)4—cho＋2cu(oh)2→ch2oh—(choh)4—cooh＋cu2o↓＋2h2o用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)。

2．蛋白质的鉴定原理

鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g／ml的氢氧化钠溶液(a)和质量浓度为0.01g／ml(b)的硫酸铜溶液。在碱性溶液(naoh)中，双缩脲(h2noc—nh—conh2)能与cu2 作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

3．脂肪的鉴定原理

脂肪可以被苏丹ⅲ染成橘黄色，被苏丹ⅳ染成红色

关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。

2.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

3．蛋白质的鉴定中先加双缩脲a，再加双缩脲b六、讨论鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的根据是什么？

推荐生物复习课培训心得体会报告六

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh 1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2 和mg2 等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。