肠杆菌科细菌(xìjūn)鉴定组员(zǔyuán)：李木生，颜大钧，郑伟坛，朱俊林，胡思妙，王荣迎，陈琳蔓第一页，共十八页。肠杆菌ǎū科细菌一般性鉴定程序未(fēnlí)挑革生药血知养分取纯兰化敏清(gǎ肠离可培染实试学njūn)杆疑养色验验试菌菌镜鉴培落检定验第二页，共十八页。一分离ē培养•无菌操作用接种环提取可疑(kěyí)肠道杆菌，在EMB上分区划线接种。送37℃培养24小时。第三页，共十八页。二纯培养ǎ（一）确定可疑菌落。1.观察EMB(guānchá)表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的单个菌落可初步定为可疑大肠杆菌菌落，标号为。（2）.凡光滑无色透明的单个小菌落可初步定为痢疾杆菌属菌落或伤寒杆菌属菌落，标号为。第四页，共十八页。（二）.可疑菌落纯化培养无菌操作(cāozuò)用接种针挑取已编号可疑菌落，分别接种在双糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37℃温箱培养24~48小时。（三）.双糖铁琼脂斜面培养特征观察与动力观察初步确定(quèdìng)为大肠杆菌初步(chūbù)确定为伤寒杆菌第五页，共十八页。革兰染色ǎ镜检挑取纯培养后的可疑菌落(jūnluò)进行革兰染色，确定为革兰阴性菌后进行细菌的生化培养基接种。短杆状，分散(fēnsàn)排列革兰阴性菌第六页，共十八页。生化试验鉴定将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接种于各种(ɡèzhǒnɡ)生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计有糖发酵管（葡.乳.麦.甘.蔗）各1支，蛋白胨水1支（I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸橼酸盐琼脂斜面1支（C）。接种完毕后，试管置于试管架上，送37℃温箱培养24~48小时后观察记录结果。第七页，共十八页。糖发酵(fājiào)试验1.不变黄，小管无气泡：糖发酵(fājiào)为阴性（—）。2.黄色，小管有气泡（产酸，产气）：糖发酵为阳性（+）。黄色，小管无气泡（产酸，不产气）：糖发酵为阳性（+）。第八页，共十八页。吲哚(yǐnduǒ)试验(I)甲基红试验(MR)试验结果：红色为吲哚试验阳性红色为甲基红试验阳性(yángxìng)（+），桔黄色为阴性（-）(yángxìng)（+），无变化为阴第九页，共十八页。性（-）VP试验(shìyàn)枸橼酸盐利用(lìyòng)试验(红色为VP阳性。斜面上有菌苔，且变成深蓝色，为阳性(yángxìng)；斜面上第十页，共十八页。无菌苔，仍是绿色为阴性。表1肠杆菌(gǎnjūn)科细菌生化反应鉴定结果记录表细葡麦甘甲枸H菌编号细萄糖葡乳糖芽糖麦露醇甘蔗糖吲哚基红甲橼酸盐枸动力VP2SH表2肠杆菌科细菌生化反应(fǎnyìng)鉴定数据参考表大菌萄乳芽露蔗吲基橼动第十一页，共十八页。2药物敏感ǐǎ试验实验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散(kuòsàn)，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。第十二页，共十八页。实验方法（一）接种肉汤培养基（二）菌液均匀涂抹平板培养基（三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大霉素和头孢拉定四种(sìzhǒnɡ)抗生素纸片贴在平板上进行培养第十三页，共十八页。实验(shíyàn)结果第十四页，共十八页。●实验(shíyàn)结果青链头庆霉霉孢大三种(sānzh素ǒnɡ)菌对链霉素素和庆大霉素敏感，但对拉霉青霉素和头孢拉定耐药。第十五页，共十八页。血清学试验第十六页，共十八页。第十七页，共十八页。内容(nèiróng)总结肠杆菌科细菌鉴定。血清学试验。无菌操作用接种环提取可疑肠道杆菌，第十八页，共十八页。
