课题(kètí)3:第一页，共十六页。PCR反响需提供(tígōng)的条件1:缓冲液中进行2:DNA模板3:分别与两条模板链相结合的两种引物4:四种脱氧核苷酸5：耐热的DNA聚合酶6：同时通过控制温度使DNA复制(fùzhì)在体外反复进行第二页，共十六页。5引物1555引物2模板(múbǎn)DNA第一次复制5555第二次复制5555555525～30次循环〔复制(fùzhì)〕后，模板DNA的含量可以扩大100万〔220〕倍以上。第三页，共十六页。体内DNA复制(fùzhì)与PCR的技术区别：解旋体内复制PCR技术引物DNA聚合酶在解旋酶作用下，细胞提加热到94oC,双链全部复制特点供(tígōng)ATP，局部解(quánbù)解开，不需解旋酶开复制的方向一般用DNA片段一小段TaqDNA聚合酶细胞自身的RDNNAA聚合酶（不耐高温）半保留复制，完全解旋后复制，从模板链半保留复制，边解旋边的一端开始复制。复制，多起点复制。子链的5’端向3’端延伸子链的5’端向3’端延伸第四页，共十六页。血红蛋白介绍：白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白是由574个氨基酸脱水缩合而成的含有四条肽链的蛋白质〔两条α链和两条β链，每一条(yītiáo)链有一个包含一个铁原子的环状血红素〕。氧气结合在铁原子上，被血液运输。因含血红素血红蛋白呈红色。血红蛋白占红细胞干重97%、总重的35%。平均每克血红蛋白可结合1.34ml的氧气，是血浆溶氧量的70倍。一个哺乳动物血红蛋白分子可以结合最多四个氧分子。血红蛋白也参与其他气体的转运：它能携带机体的局部二氧化碳〔大约10%〕。(xuèhóngdànbái)第五页，共十六页。回忆：蛋白质根本单位(dānwèi)？合成场所？蛋白质的分子结构具有多样性的直接原因？根本主要原功能因？蛋白质的实功例能？组成细胞的结构成分细胞膜中的蛋白质，染色体中的蛋白质等运输功能细胞膜上的载体蛋白、运输氧气的血红蛋白等催化功能胃蛋白酶、纤维素酶等调节功能生长激素、胰岛素等激素免疫功能B淋巴细胞受到抗原刺激后产生的抗体思考：蛋白质的别离和提取的原理(yuánlǐ)是根什据么蛋？白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以(kěyǐ)用来别离不同蛋白质。第六页，共十六页。一、根底知识：㈠凝胶色谱法〔分配(fēnpèi)色谱法〕：1、凝胶：一些微小多孔的球体(qiútǐ)〔内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖〕2、概念：根据(gēnjù)相对分子质量的大小别离蛋白质的方法第七页，共十六页。3、原理：当不同(bùtónɡ)的蛋白质通过凝胶时，相相对对〔(xiāngduì)分子质量较小〕的蛋白质容易进入凝胶内部的较通长道，路程〔〕较，慢移动速度〔相对分子(〕fēnzǐ)，质而量〔较大〕的蛋白质无法进入凝胶内路凝部程胶的〔通外道部，只〕能，在移〔动速度〔较短〕移动，〕，相对分子较质量快不同(bùtónɡ)的蛋白质因此得以别离。〔分子筛效应〕第八页，共十六页。用凝胶色谱法别离(fēnlí)蛋白质时，分子量大的蛋白质()DA．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快4、具体(jùtǐ)过程第九页，共十六页。第十页，共十六页。相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一(bùtónɡ)B个第十一页，共十六页。㈡缓冲溶液(huǎnchōnɡ1rón、ɡyè)组：成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成如:H2CO3/NaHCO3;CH3COONa/CH3COOH，NaH2PO4/Na2HPO4;KH2PO4/K2HPO4等2、作用(zuòyòng)：能够抵抗〔外界(wàijiè)的酸或〕对溶液的〔PH值碱〕的影响，维持PH根本不变。3、缓冲溶液的配制:通常由1-2种缓冲剂溶解于水中配制而成。第十二页，共十六页。㈢电泳(diàn：1、概念：yǒnɡ)(gàiniàn)指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理(yuánlǐ)：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。从而实现样品中各种不同蛋白质分子的别离。第十三页，共十六页。3.分类(fēnlèi)：琼...
